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干扰素抗丙型肝炎病毒的作用研究

2013-05-07 14:27:54 来源:中华肝病网 浏览:1647

干扰素刺激基因ISG20抗丙型肝炎病毒的作用研究

徐华 雷宇 钟珊 彭凤英 周智 李奎 任红
 
【摘要】  目的  研究干扰素刺激基因ISG20对HCV的抑制作用及其机制,为探索丙型肝炎新的治疗方法提供依据。 方法  将含ISG20基因,其无功能突变体ISG20m和相应空白载体的质粒pcDNA3.1瞬时转染Huh7、Huh7.5和HEK293细胞,观察ISG20对HCV单顺反子复制子pSGRm-JFH1blaRL的抑制作用。同时将含ISG20、ISG20m基因和相应空白质粒的逆转录病毒载体pCX4Bsr转染Huh7.5细胞,建立稳定表达该基因的细胞系。将pSGRm-JFH1blaRL复制子转染ISG20细胞系,观察ISG20对该复制子的抑制作用。用细胞培养产生的HCV感染ISG20细胞系,探索其对HCV复制滴度的影响。数据比较用两因素多水平重复测量的方差分析。 结果  成功构建了稳定表达ISG20及其突变体的细胞系7.5-ISG20、7.5-ISG20m和质粒对照7.5-Bsr,免疫荧光证实ISG20和ISG20m表达于细胞质和细胞核。pSGRm-JFH1blaRL RNA在7.5-ISG20细胞中的复制被严重抑制,在所检测的各个时间点,其复制水平为7.5-ISG20m和7.5-Bsr细胞中的9.1%~16.7%。在Huh7、Huh7.5和HEK293细胞中,瞬时表达的ISG20对HCV复制子RNA也有明显的抑制作用,其复制水平为对照的16.7%~25.0%。HCV在7.5-ISG20细胞中扩增得到相似的结果,在感染后48~72 h,HCV在7.5-ISG20细胞上清液中的滴度为7.5-ISG20m和7.5-Bsr细胞中的9.1%~12.5%。Western blot实验结果显示,7.5-ISG20细胞中HCV核心蛋白表达也明显减少。 结论  ISG20无论在瞬时转染的细胞和稳定表达的细胞系中均能抑制HCV复制子复制,并能减少HCV的扩增,这种抑制作用与ISG20的核酸外切酶作用密切相关。
【关键词】 干扰素;肝炎病毒,丙型;复制子;ISG20;体外研究

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