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DN-PP2Acα突变体表达载体对肝癌细胞生长的影响

2013-08-19 09:12:30 来源:中华肝病网 浏览:1255

  目的 构建肝癌组织特异性启动子驱动的蛋白磷酸酶2A催化亚基α显性负性突变体(DN-PP2Acα)表达载体,研究其对肝癌细胞生长的影响。

  方法 将甲胎蛋白(AFP)基因的增强子和磷酸甘油酸激酶(pgk)基因的启动子组合形成的肝癌组织特异性AFpg启动子。采用定点突变将野生型蛋白磷酸酶2A催化亚基α(PP2Acα)突变为DN-PP2Acα。将AFpg启动子和DN-PP2Acα编码序列构建成AFpg启动子调控的DN-PP2Acα表达载体pGL3-Basic-AFpg-PP2Acα。荧光素酶报告基因实验检测AFpg启动子的转录活性。质粒pcDNA3.1(+)、pGL3-Basic、pcDNA3.1(+)-DN-PP2Acα、pGL3-Basic-AFpg、pGL3-Basic-AFpg-PP2Acα分别转染L02、SK-Hep-1、HepG2和Hep3B细胞,Western blot检测PP2Ac蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞生长情况。成组t检验分析不同处理组间的细胞活力差异。

  结果 L02、SK-Hep-1、HepG2和Hep3B细胞中,AFpg启动子相对荧光素酶活性分别为3.61 ± 1.07、3.46 ± 0.66、98.70 ± 18.60、88.70 ± 19.53,AFpg启动子在表达AFP的细胞中具有高转录活性。pGL3-Basic-AFpg-PP2Acα可特异性地使DN-PP2Acα表达于AFP阳性肝癌细胞HepG2和Hep3B,并抑制其生长,转染72 h后,HepG2细胞活力下降42.65% ± 3.99%, Hep3B细胞活力下降39.87% ± 3.91%,与0 h时比较,差异均有统计学意义(t值分别为13.0563和12.9920,P值均<0.01)。pGL3-Basic-AFpg-PP2Acα对AFP阴性细胞的生长无明显影响。

  结论 AFpg 启动子调控的DN-PP2Acα表达载体特异性地抑制AFP阳性肝癌细胞的生长,可用于肝癌组织特异性基因治疗。

  原题:蛋白磷酸酶2A催化亚基α显性负性突变体表达载体对肝癌细胞生长的影响

  作者:李道明 李伟 陶敏 陈凯 龚斐然 徐泽宽 陈政

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