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HBV X蛋白及其截短体与损伤DNA结合蛋白1的作用

2013-08-22 16:13:01 来源:中华肝病网 浏览:1190

  目的  探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)及其两个截短体(HBx1~101、HBx43~154)与损伤DNA结合蛋白(DDB) 1在HBV复制中的作用。

  方法  用质粒瞬时转染HepG2细胞,72 h后分别提取细胞总蛋白质和总RNA,通过Western blot分析验证DDB1蛋白表达,逆转录实时定量PCR在基因的mRNA水平观察HBx蛋白及其截短体对DDB1蛋白表达的影响。提取转染72 h后细胞胞质DNA,收集细胞的培养上清液,通过实时定量PCR及酶联免疫吸附试验检测各组细胞胞质HBV DNA复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平,从而观察HBx蛋白及其两个截短体与DDB1对HBV复制的影响。对数据进行单因素方差分析及t检验。

  结果  在有HBV复制的HepG2细胞中,缺失HBx转染组细胞中DDB1蛋白在mRNA水平明显下降(相对表达水平为野生型转染组的52.74% ± 8.95%,t = 9.143,P<0.05),胞质DNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平也明显下降(相对表达水平分别为野生型转染组的55.49% ± 1.19%、48.05% ± 2.90%、46.22% ± 2.20%,P值均<0.05)。共转染HBx N-端截短体HBx43~154后细胞中DDB1蛋白mRNA水平恢复到野生型水平,且能使缺失HBx蛋白的HepG2细胞中胞质HBV DNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg的表达恢复到野生型水平。但共转染HBx C-端截短体HBx1~101的细胞中DDB1蛋白在mRNA水平较野生组明显下降(相对表达水平为野生型转染组的59.95% ± 9.09%,t = 7.629,P<0.05),且不能使转染缺失HBx蛋白的HepG2细胞中胞质HBV DNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg的表达恢复到野生型水平(相对表达水平分别为野生型转染组的62.53% ± 0.67%、63.13% ± 2.14%、55.40% ± 0.99%,P值均<0.05)。并且各转染组DDB1蛋白mRNA水平变化与胞质HBV DNA复制和培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平是一致的。

  结论  C-端53个氨基酸及DDB1蛋白对于HBV野生型水平的复制是需要的,而N-端42个氨基酸对于HBV复制水平无明显影响。C-端53个氨基酸对HBV复制的影响作用可能是通过影响DDB1蛋白水平实现的。

  原题:乙型肝炎病毒X蛋白及其截短体与损伤DNA结合蛋白1在HBV复制中的作用
  作者:杨旋 何松 罗娜 罗莉 樊浩 龚倩

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