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芳香烃受体核易位蛋白2基因表达对HCCLM6细胞侵袭和迁移

2010-03-12 12:12:14 来源:中华肝病网 浏览:2781

芳香烃受体核易位蛋白2基因表达对HCCLM6细胞侵袭和迁移的影响
李薇薇  吴伟忠  梁英  肖春丽  陶中华  王鲁  孙惠川  樊嘉
【摘要】  目的  探讨短发夹(sh)RNA-芳香烃受体核易位蛋白(ARNT)2i慢病毒表达载体对高转移肝癌细胞HCCLM6侵袭和迁移的影响。 方法  以ARNT2为目的基因,化学合成4条干扰RNA,与经MluⅠ和ClaⅠ酶切后的pLVTHM载体连接过夜,筛选并鉴定阳性克隆。利用脂质体2000将shRNA-ARNT2i, pCMV-dR8.74, pMD2G共转染293T细胞,获得shRNA-ARNT2i慢病毒颗粒,进一步感染HCCLM6靶细胞,并分为转染shRNA-ARNT2i组、未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组。用荧光实时定量PCR和Western blot检测ARNT2基因的干扰效率。应用划痕和Boyden小室法观察ARNT2表达下调对HCCLM6侵袭和迁移能力的影响。用SPSS16.0统计软件对数据进行独立样本t检验和方差分析,其中多组资料两两比较采用LSD法。 结果  荧光实时定量PCR检测转染shRNA-ARNT2i组,未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组3组ARNT2 mRNA相对表达值分别为0.154±0.024、0.860±0.145、1.004±0.009, F=113.14, P<0.01,差异有统计学意义;Western blot显示转染shRNA-ARNT2i组ARNT2蛋白的表达量为16.45±1.6,转染阴性对照序列组ARNT2蛋白的表达量为44.56±2.07, 两组比较,t=18.58, P<0.01,差异有统计学意义;转染shRNA-ARNT2i组细胞在划痕48h后基本愈合,而转染阴性对照序列组和未转染的空白对照组划痕依然可见;转染shRNA-ARNT2i组穿膜细胞数为(13.25±1.04)个,而未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组的穿膜细胞数分别为(6.50±2.56)个、(6.75±2.05)个, F=29.645,P<0.01,差异有统计学意义。 结论  shRNA-ARNT2i载体能显著下调HCCLM6细胞ARNT2基因和蛋白的表达,促进HCCLM6细胞的运动和侵袭。
【关键词】  癌,肝细胞; 侵袭,肿瘤; 迁移,细胞; 芳香烃受体核易位蛋白

Effects of ARNT2 gene on invasion and migration of human hepatocellular carcinoma HCCLM6 cell line   LI Wei-wei, WU Wei-zhong, LIANG Ying, XIAO Chun-li, TAO Zhong-hua, WANG Lu, SUN Hui-chuan, FAN Jia. Liver Cancer Institute and Zhongshan Hospital, Fudan Unviersity, Shanghai 200032, China

  请您订阅《中华肝脏病杂志》2010年第18卷第1期,P27-31.获取全文内容。

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